jacky
问题补充说明：革兰氏阳性菌如何做菌落PCR？煮20 min后，还是不能P出目的条带。
取1ml菌液离心去培养基或者刮取少许菌苔，加入100μl无菌水混匀。EP管放入冷水中，然后开始加热，让菌液慢慢升到100℃，而不是在水已经沸腾的时候加入菌液去煮。沸腾开始后计时，十分钟后迅速放入-20℃冰箱，冷冻十分钟。取出菌液，融兰化后8000rpm离心1分钟，取上清作为PCR模板。因为煮沸的效率低，所以50μl的PCR体系模板最好加1.5μl-2连μl。
我以前也是革兰氏阳性菌直接放入沸水煮结果P不出来，可能是因为刚北浓局细胞壁厚，突然受热后细菌表面形成变性层，反而保护了细菌的结构，类似于纯酒精不能消毒的原理吧。改进后都能P出来。希望对你能够有效。
