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聚合酶链片满英孙评式反应的定义、原理及应用

问题补充说明:分子生物学简答题,帮忙做一下!谢谢

聚合酶链片满英孙评式反应的定义、原理及应用

聚合酶链式反应(PolymeraseCh附万般然冲ainReaction,PCR)是体外酶促合成特来自异DNA片段的一种方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引余扬印角八队个任举物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是:将待扩增的模板DNA置高温下(通常为93℃-94℃)使其变性解成单链;人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合,两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短;耐热的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入,以目的基因为模板从5’血要建化信→3’方向延伸,合成DNA的新互补链。

PCR能快速特异扩增任何已知目的基因或DN互投抓铁杨孔东识奏西A片段,并能轻易在皮克(pg)水平起始DNA混合物中的目的基因扩增达到纳克、微克、毫克级的特异性DNA片段。因此,PCR技术一经问世就被迅速而广泛地用于分子生物学的各个领域。它不仅可以用于基因的分离、克隆和核苷酸序列分析,还可以用于突变体和重组体的构建,基因360问答表达调控的研究,基因多态性的分析,遗传病和传染病的诊断,肿瘤机制的探索,法医鉴定等诸多方面。通常,PCR在分子克隆和DNA分析中有着以下抓多种用途:

(1)生成双链DNA中的特异序列作为探针;

(2)由少量土贵持团步福或制离丝祖mRNA生成cDNA文库;

(3)从cDNA中克隆某些基因;

(4)生盟药七成大量DNA以进行序列测定;

(5)突变的分析;

(6)染色体步移;

(7)RAPD、AFLP够等十引简罗游农道首利、RFLP等DNA高改既文田刑乡配多态性分析等。

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